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杏鲍菇工厂1、菌株恢复培养:用无菌吸管吸取0.3--0.5ml适宜的液体培养基,滴入安瓿管内,轻轻振荡,使冻干菌体溶解呈悬浮状 。 吸取全部菌体悬浮液,移植于1-2支建议的培养基试管中,并在建议的条件下培养 。
2、传代保存法:培养基的浓度不宜过高,营养成分不宜过于丰富,尤其是碳水化合物的浓度应在可能的范围内尽量降低 。 培养温度通常以稍低于最适生长温度为好 。 若为产酸菌种,则应在培养基中添加少量碳酸钙 [3] 。
3、① 低温冰箱保存法(-20℃、-50℃或-85℃):低温冷冻保存时使用螺旋口试管较为方便,也可在棉塞试管外包裹塑料薄膜 。 保存时菌液加量不宜过多,有些可添加保护剂 。 此外,也可用φ5mm的玻璃珠来吸附菌液,把玻璃珠置于塑料容器内,再放入低温冰箱内进行保存的 。
4、一般采用琼脂斜面培养基,培养基中含有一些适合产孢子的营养成分,如麸皮、豌豆浸汁、蛋白胨和一些无机盐等 。 碳源和氮源不要太丰富(碳源约为1%,氮源不超过0.5%),碳源丰富容易造成生理酸性的营养环境,不利于放线菌孢子的形成,氮源丰富则有利于菌丝繁殖而不利于孢子形成 。 一般情况下,干燥和限制营养可直接或间接诱导孢子形成 。 放线菌斜面的培养温度大多数为28 ℃,少数为37 ℃,培养时间为5~14天 。
5、霉菌的孢子培养,一般以大米、小米、玉米、麸皮、麦粒等天然农产品为培养基 。 这是由于这些农产品中的营养成分较适合霉菌的孢子繁殖,而且这类培养基的表面积较大,可获得大量的孢子 。 霉菌的培养一般为25~28 ℃,培养时间为4~14天 。
6、摇瓶种子进罐,常采用母瓶、子瓶两级培养,有时母瓶种子也可以直接进罐 。 种子培养基要求比较丰富和完全,并易被菌体分解利用,氮源丰富有利于菌丝生长 。 原则上各种营养成分不宜过浓,子瓶培养基浓度比母瓶略高,更接近种子罐的培养基配方 。
7、种子罐种子制备的工艺过程,因菌种不同而异,一般可分为一级种子、二级种子和三级种子的制备 。 孢子(或摇瓶菌丝)被接入到体积较小的种子罐中,经培养后形成大量的菌丝,这样的种子称为一级种子,把一级种子转入发酵罐内发酵,称为二级发酵 。 如果将一级种子接入体积较大的种子罐内,经过培养形成更多的菌丝,这样制备的种子称为二级种子,将二级种子转入发酵罐内发酵,称为三级发酵 。 同样道理,使用三级种子的发酵,称为四级发酵 。
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